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超低温保存液置于含有细菌的冷冻保护剂的安瓿瓶,瓶安瓿液氮(- 196℃)保存。当菌丝体在196℃时,它的新陈代谢减少到停止的状态。
最的液氮超低温保存种
具体操作如下:
(1)菌株培养在PDA培养基平板培养22-24日在10-15天,在菌丝生长、琼脂块被切断穿支(直径2-4毫米)或切成2毫米X4毫米的矩形块的手术刀片。
(2)玻璃安瓿安瓿管的制备,能够经受突然的温度而不破裂,易被火焰密封管,易于开启培养。一般使用硼硅酸盐玻璃管,大小根据需要,通常安瓿瓶的75毫米×10毫米或1.2毫升的液体体积是适当的。
选用安瓿管,用墨水书写,细菌菌种保存在管壁的食用菌中,160度干热灭菌,使标记牢固地固定在管壁上。
(3)水甘油水溶液或10%个亚甲基为保护剂溶液,每管加入0.8毫升蒸10%可以作为冷冻保护剂。
用无菌镊子菌丝块与琼脂块移动及安瓿管保护剂。火焰管上密封安瓿,浸在水中检查漏气。
(4)小塑料安瓿瓶氮气保护管有良好的细菌放置孔(放一块铁,塑料瓶底部用安瓿瓶制成的塑料瓶可以用液氮罐),瓶盖,连接瓶里的一个字符串和标记,从而提出应变。将塑料瓶安瓿管挂在罐口,安瓿管慢慢冷却,大约30后,安瓿管浸入液氮中进行长期保存。
使在液氮罐中保存的细菌,应该是35-40度温水瓶在瓶,冰迅速融化的瓶子,然后打开安瓿瓶无菌条件下接种细菌在适宜的培养基嵌段接枝,22-24°C活化培养。
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